بررسي امكان طراحي روش RT – PCR براي تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 در نمونه هاي توموري بدخيم پستان

بررسي امكان طراحي روش RT – PCR براي تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 در نمونه هاي توموري بدخيم پستان

دسته: پزشكي
بازديد: 14 بار
فرمت فايل: doc
حجم فايل: 1034 كيلوبايت
تعداد صفحات فايل: 102

هدف از اين رساله بررسي امكان طراحي روش RT – PCR براي تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 در نمونه هاي توموري بدخيم پستان مي باشد

قيمت فايل فقط 145,000 تومان



بررسي امكان طراحي روش RT – PCR براي تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 در نمونه هاي توموري بدخيم پستان

چكيده:

سرطان پستان از شايع ترين سرطان هاي زنان است كه سبب مرگ زنان زيادي مي شود. موتاسيون هاي بسياري نظير ازدياد آنكوژن ها و يا حذف ژن هاي سركوبگر تومور در اين سرطان شناسايي شده اند؛ در بين آنكوژن ها، erb-B2 كه به خانواده EGFR (گيرنده فاكتور رشد اپيدرمي) تعلق دارد در 30%-25% تومورهاي پستان با منشاء سلول هاي داكتال ازدياد پيدا مي كند. (80% سرطان هاي پستان منشا داكتال دارند.)در بيماراني كه erb-B2 در آن ها ازدياد پيدا كرده بيماري مي تواند تا حدي با استفاده از يك آنتي بادي مونوكلنال انساني شده عليه محصول پروتئيني ژن erb-B2 به نام هرسپتين مهار شود.از اين رو شناسايي تومورها يي كه erb-B2 در آن ها ازدياد پيدا كرده اهميت دارد.روش روتين در شناسايي اين تومورها ايمونوهيستوشيمي (IHC) مي باشد.

در اين مطالعه 50 نمونه از بيمارستان دي جمع آوري شد كه بر اساس نتايج IHC، 32% نمونه ها ازدياد آنكوژن erb-B2 را نشان مي دادند.جهت مقايسه RT-PCR و IHC، RNA اين نمونه ها استخراج شد و RT-PCR براي آن ها انجام شد كه در آن دو جفت پرايمر طراحي شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبين به عنوان كنترل داخلي تكثير مي كردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روي ژل آگاروز برده شدند و شدت باند هاي مربوط به erb-B2 و كنترل داخلي با يكديگر مقايسه گرديد. در نهايت از مقايسه نتايج حاصله از RT-PCR با نتايج IHC مشخص شد كه بازده RT-PCR در تشخيص نمونه هاي با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه هاي 2+، نيز 100% مي باشد.   همچنين آزمايش PCR بر روي DNA استخراج شده از بافت توموري و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت كه نتايج مربوط به اين آزمايش نيز نتايج بدست آمده از RT-PCR را تاييد مي كردند. 

كلمات كليدي:

سرطان

داكتال

آنكوژن ها

موتاسيون

سرطان پستان

سرطان هاي زنان

مقايسه RT-PCR و IHC، RNA

مقدمه:

 در پستان نرمال، داكتها و لوبولها بوسيله دو نوع سلول فرش مي شوند يك دسته سلول هاي مسطح كه يك لايه ناپيوسته از سلول هاي قابل انقباض حاوي ميوفيلامان ها هستند (سلول هاي ميواپي تليال  ) و روي غشاي پايه قرار دارند . اين سلول ها در خروج شير در طي دوره شير سازي همكاري مي كنند و نقش مهمي در حفظ ساختار و عملكرد نرمال لوبول ها و غشاي پايه دارند (86). لايه دومي از سلول‌هاي پوششي كف لومن را فرش كرده است ( سلول هاي لومينال   ). 

داكت هاي انتهايي و لوبولها شيرتوليد مي كنند ولي سلول هاي بخشهاي ديگر داكت، در توليد شير نقشي ندارند.منشأ سلول هاي لومينال و اپيتليال ، سلول هاي بنيادي واقع در ترمينال داكت ها در نظر گرفته  مي شود(6). بخش اصلي بستر پستان از بافت پيوندي فيبروس متراكم مخلوط با بافت چربي تشكيل شده است كه همان  بستره بين لوبولي  است. لوبولها بوسيله يك بستره ظريف احاطه شده اند كه بافت ويژه پستان است و خصوصيات پاسخ دهنده به هورمون دارد و داراي تعدادي  لنفوسيت مي باشد  (85).  

فهرست مطالب

چكيده: 1

فصل اول:مقدمه 5

1-1- غدد پستاني 6

1-1-1- ساختار پستان نرمال 6

شكل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55) 7

1-1-2- تغييرات پستان در چرخه زندگي 8

1-2 -كارسينوماي پستان 10

1-2-1-كارسينوما 10

1-2-2- ريسك فاكتورها 12

1-2-3- سبب شناسي سرطان پستان 16

1-2-5- سرطان پستان غير وراثتي 19

1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها 21

1-2-5-1-4- مسيرهاي بقاي سلولي و مرگ سلولي 23

1-2-5-1-4-1- تلومراز 23

1-2-5-1-4-2- ژن هاي وابسته به آپوپتوز 24

1-2-6-1- طبقه بندي كارسينوماهاي پستان بر اساس مطالعات ميكرواري (از لحاظ ملكولي) 26

1-2-6-1-1-كارسينوماهاي ER- مثبت 26

1-2-6-1-2-كارسينوماي هاي ER- منفي 26

1-2-6-1-3-كارسينوماهاي  Basal-like 27

1-2-6-1-4-كارسينوماهاي HER2/neu- مثبت 27

شكل 1-3- نماي شماتيك خانواده HER (90) 28

1-2-7- طبقه بندي كارسينوماهاي پستان از لحاظ بافت شناسي 31

1-2-7-1- كارسينوما هاي در جا و تهاجمي(شكل 1-6 ) 31

شكل (1-5) – كارسينوماهاي درجا و تهاجمي (85) 32

فصل دوم:مروري بر مطالعات انجام شده 34

2-1- تكنيك هاي سنجش HER2/neu 35

2-1-1- ايمونوهيستوشيمي (IHC) 35

2-1-2- ساترن و اسلات بلات 37

2-1-3-تكنيك FISH 37

2-1-4- تكنيك CISH ) (Chromogenic in situ hybridization 38

2-1-5- تكنيك ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA 38

2-2- وضعيت HER2 و پيشگويي پاسخ به درمان با هرسپتين 40

2-3- HER2/neu فسفريله به عنوان يك ماركرپروگنوستيك و پيش گويي بالقوه 41

2-4- سنجش بخش خارج سلولي HER2 در جريان خون به عنوان تومور ماركر 41

2-5- خلاصه 42

2-2- هدف 43

فصل سوم:مواد و روشها 44

مواد و روشها 44

3-1- استخراج RNA ي كل از بافت 45

3-2- بررسي كمي و كيفي RNA ي استخراج شده 50

3-2-1- UV اسپكتروفتومتري 50

3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106) 52

طرز تهيه محلول ها و بافرهاي مورد نياز در الكتروفورز : 53

محلول اتيديوم برومايد (10 mg /ml) 54

مواد و وسايل لازم 55

جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA 58

3-3 تيمار RNAي استخراج شده با آنزيم DNase [149] 58

طرز تهيه مخلوط dNTP از هر يك از نوكلئوتيدها 60

3-5- واكنش PCR [2] 63

3-5-1 طراحي پرايمر: 63

3-5-2- آماده سازي پرايمرهاي PCR [2] 66

3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer) 70

3-7-1- سنجش غلظت DNA 71

3-9- ايمنوهيستوشيمي Immunohistochemical (IHC) Techniques 73

فصل چهارم:بحث و نتايج 76

بحث و نتايج 76

4-1- نتايج 77

4-1-1- تعيين كيفيت و كميت RNA ي استخراجي 77

4-1-2- بهينه سازي واكنش PCR 78

4-1-3-  RT - PCR 80

4-2-  بحث و پيشنهادات 84

4-2-1- بحث 84

4-2-2- علت انتخاب RT- PCR 85

4-2-4- پيشنهادات 87

منابع 88

قيمت فايل فقط 145,000 تومان



برچسب ها : بررسي امكان طراحي روش RT – PCR براي تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 در نمونه هاي توموري بدخيم پستان , پايان نامه سرطان پستان , طراحي روش RT – PCR , تشخيص ازدياد بيان ژني ژن HER2 , شناسايي تومورهاي erbB2 , شناسايي تومورهاي erbB2 با ايمونوهيستوشيمي (IHC)